アルカリけん化処理
アシル化アンントシアニンに結合している有機酸と配糖体(脱アシル化アントシアニン)の分析
@試料(アシル化アントシアニンの抽出溶液);1ml
A試料の入った試験管を液体窒素で満たす
B試料と等量の10%水酸化ナトリウム(1ml)を加え、45〜60分間室温に放置。
C試料は黄褐色〜緑褐色なっているので、2N塩酸を赤色が回復するまで徐々に(過剰投与に注意)加える。
Dさらに等量のジエチルエーテルを加え、振盪する。
E静置し、上層(有機酸が転溶)と下層(脱アシル化アントシアニンと塩)に分かれるのを待つ。
a.上層(有機酸が転溶)
Fジエチルエーテルを蒸発させる
G少量のメタノールに溶かしてTLC
HUVで検出(アンモニア蒸気による測定も行う)
b.下層(脱アシル化アントシアニンと塩)
I2〜3回ジエチルエーテルを加え振盪し、上層はa.に集める。
Jエタノールで塩の完全除去
Kエバポレーターで濃縮
L分析(TLC、HPLC、etc)
表9アシル化アントシアニンにみられる主な有機酸のRf値*
展開溶剤 | ||||||
ベンゼン/酢酸/水(6:7:3) | イソプロピルアルコール/28%アンモニア/水(8:1:1) | 1%塩酸 | n-ブタノール/酢酸/水(4:1:2) | 紫外線による蛍光(アンモニア蒸気中) | ||
有機酸 | p-クマール酸 | 0.57 | 0.40 | 0.35 | 0.94 | 紫色(青紫色) |
カフェ酸 | 0.12 | 0.10 | 0.22 | 0.89 | 青色(青白色) | |
フェルラ酸 | 0.83 | 0.32 | 0.29 | 0.92 | 青紫色(青色) |
作成中図21アサガオ.Y-54カラムクロマトグラフィによるフラボノイドの分類
表10おもなアントシアニンのRf値
アントシアニン | 溶剤** | ||||
BAW | BuHCl | 1%HCl | HAc-HCl | ||
ペラルゴニジン配糖体 | |||||
3-グルコシド | 0.44 | 0.38 | 0.14 | 0.35 | |
3-ガラクトシド | 0.39 | 0.37 | 0.13 | 0.33 | |
3-ルチノシド | 0.37 | 0.30 | 0.22 | 0.44 | |
3-ソホロシド | 0.36 | 0.30 | 0.38 | 0.65 | |
3,5-ジグルコシド | 0.31 | 0.14 | 0.23 | 0.45 | |
3-ルチノシド-5-グルコシド | 0.29 | 0.13 | 0.40 | 0.58 | |
3-ソホロシド-5-グルコシド | 0.23 | 0.10 | 0.60 | 0.68 | |
モナルデイン | 0.40 | 0.46 | 0.19 | 0.53 | |
サルビアニン | 0.37 | 0.37 | 0.17 | 0.48 | |
マッチオラニン | 0.34 | 0.29 | 0.37 | 0.61 | |
シアニジン配糖体 | |||||
3-グルコシド | 0.38 | 0.25 | 0.17 | 0.26 | |
3-ガラクトシド | 0.37 | 0.24 | 0.07 | 0.26 | |
3-ルチノシド | 0.37 | 0.25 | 0.19 | 0.43 | |
3-ソホロシド | 0.33 | 0.22 | 0.34 | 0.61 | |
3,5-ジグルコシド | 0.28 | 0.06 | 0.16 | 0.40 | |
3-ルチノシド-5-グルコシド | 0.25 | 0.08 | 0.36 | 0.59 | |
3-ソホロシド-5-グルコシド | 0.17 | 0.09 | 0.54 | 0.62 | |
ヒヤシンチン | 0.33 | 0.63 | 0.04 | 0.24 | |
ペリラニン(シソニン) | 0.35 | 0.34 | 0.11 | 0.43 | |
ルブロブラニンC | 0.21 | 0.13 | 0.39 | - | |
ペオニジン配糖体 | |||||
3-グルコシド | 0.41 | 0.30 | 0.09 | 0.33 | |
3-ガラクトシド | 0.39 | 0.28 | 0.10 | 0.32 | |
3-ルチノシド | 0.34 | 0.14 | 0.16 | 0.41 | |
3,5-ジグルコシド | 0.31 | 0.10 | 0.17 | 0.44 | |
3-ルチノシド-5-グルコシド | 0.29 | 0.12 | 0.37 | 0.60 | |
デルフィニジン配糖体 | |||||
3-グルコシド | 0.26 | 0.11 | 0.03 | 0.18 | |
3-ガラクトシド | 0.23 | 0.11 | 0.03 | 0.18 | |
3-ルチノシド | 0.30 | 0.15 | 0.11 | 0.37 | |
3-ルチノシド-5-グルコシド | 0.20 | 0.06 | 0.37 | 0.61 | |
3,5-ジグルコシド | 0.15 | 0.03 | 0.08 | 0.32 | |
アオバニン | 0.30 | 0.22 | 0.05 | 0.32 | |
デルファニン(ビオラニン) | 0.31 | 0.24 | 0.31 | 0.59 | |
ペチュニジン配糖体 | |||||
3-グルコシド | 0.35 | 0.14 | 0.04 | 0.22 | |
3-ガラクトシド | 0.33 | 0.13 | 0.04 | 0.20 | |
3-ルチノシド | 0.35 | 0.16 | 0.13 | 0.42 | |
3-ソホロシド | - | 0.17 | 0.36 | 0.66 | |
3,5-ジグルコシド | 0.24 | 0.04 | 0.08 | 0.32 | |
3-ルチノシド-5-グルコシド | 0.23 | 0.06 | 0.38 | 0.61 | |
ベタニン | 0.32 | 0.26 | 0.19 | 0.59 | |
マルビジン配糖体 | |||||
3-グルコシド | 0.38 | 0.15 | 0.06 | 0.29 | |
3-ガラクトシド | 0.36 | 0.15 | 0.06 | 0.29 | |
3-ルチノシド | 0.35 | 0.16 | 0.15 | 0.45 | |
3,5-ジグルコシド | 0.31 | 0.03 | 0.13 | 0.42 | |
3-ルチノシド-5-グルコシド | 0.30 | 0.05 | 0.40 | 0.63 | |
チボウヒニン | 0.40 | 0.42 | 0.10 | - | |
ネグンテイン | 0.36 | 0.28 | 0.20 | 0.64 |