ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）
ａ．一次元展開による同定
@色素抽出溶液を濃縮
Aキャピラリーで薄層上にスポット
コクロマトグラフィー；標品も同時にスポット
スポットするごとに乾燥させ、スポットの大きさは３mm
B展開溶媒の選択→Ｃ．
C展 開
Dスポットを十分に風乾させた後に行わないと分離しない。
Eスポットは絶対に溶剤の中につけないこと
できるだけ端まで展開
F薄層を冷風などで乾かす
G色、Ｒｆ値を測定（暗所で紫外線ランプによる測定も行う）
ｂ．２次元展開による測定
@抽出溶液を濃縮
Aキャピラリーで薄層上にスポット
Bスポットを冷風などで乾かす
C展開溶媒の選択
D１次元目と２次元目の展開溶媒を決める
E１次元目の展開
できるだけ端まで展開
G２次元目の展開
できるだけ端まで展開
I色、Ｒｆ値を測定（暗所で紫外線ランプによる測定も行う）
ｃ．ＴＬＣ展開溶剤
アントシアニン類、フラボン類は以下のような展開溶剤を調整し、いずれかを用いて展開する。
n-ブタノール／酢酸／水(4:1:5
容積比 上層)；アントシアニン類、フラボン類共用
n-ブタノール／濃塩酸／水(7:2:5
容積比 上層)、水／濃硫酸(97:3 容積比)；アントシアニン類用
水／酢酸(85:15 容積比)；フラボン類用
また、クロロフィル、カロチノイドは次のいずれかの溶剤を用いて冷暗所で展開を行う。この場合は揮発性の高い溶剤を用いるので、展開に使用する容器は展開中必ず密封しておくこと。
ベンゼン／石油エーテル／アセトン(10:2.5:2容積比)
石油エーテル／ベンゼン／アセトン(4:1:0.5容積比)
表８ ペーパークロマトグラフィーによるアントシアニン定性用展開溶媒＊
|
略号 |
展開溶媒の組成 |
混合比 |
| Bu.
AA-1 |
n-ブタノール-酢酸-水 |
4：1：2 |
| Bu.
AA-2 |
n-ブタノール-酢酸-水 |
4：1：5 |
| Bu.
A |
n-ブタノール-２Ｎ塩酸 |
1：1 |
| Bu.
AH |
n-ブタノール-36％塩酸-水 |
5：1：2 |
| Bu.
H |
n-ブタノール-濃塩酸-水 |
7：2：5 |
| Bu.
AmPb |
n-ブタノール-0.5Ｎ(NH4)
4HPO4飽和溶液 |
|
| Bu.
PrH |
n-ブタノール-ピリジン-水 |
6：3：1 |
| CAH |
m-クレゾール-酢酸-水 |
50：2：48 |
| CFH |
o-クレゾール-80％ギ酸-水 |
12：3：5 |
| EAH |
酢酸エチル-酢酸-水 |
4：1：2 |
| EFH |
酢酸エチル-80％ギ酸-水 |
8：2：3 |
| FAH-1 |
80％ギ酸-36％塩酸-水 |
5：1：4 |
| FAH-2 |
80％ギ酸-36％塩酸-水 |
5：2：3 |
| AAH-1 |
酢酸-36％塩酸-水 |
5：1：5 |
| AAH-2 |
酢酸-濃塩酸-水 |
15：3：82 |
| iBu.
AH |
イソブタノール-36％塩酸-水 |
100：65：100 |
| 1％塩酸 |
水-濃塩酸 |
97：3 |
＊植物化学実験書（植物化学研究会編,広川書店,東京）,Shibataら(1960),Harborne(1967)などより
ｄ．Ｒｆ値
図20 Rf値
表10 おもなアントシアニンのRf値
|
溶剤** |
BAW |
BuHCl |
1％HCl |
HAc-HCl |
|
| アントシアニン |
|||||
| ペラルゴニジン配糖体 |
|
|
|
|
|
| |
3-グルコシド |
0.44 |
0.38 |
0.14 |
0.35 |
| |
3-ガラクトシド |
0.39 |
0.37 |
0.13 |
0.33 |
| |
3-ルチノシド |
0.37 |
0.30 |
0.22 |
0.44 |
| |
3-ソホロシド |
0.36 |
0.30 |
0.38 |
0.65 |
| |
3,5-ジグルコシド |
0.31 |
0.14 |
0.23 |
0.45 |
| |
3-ルチノシド-5-グルコシド |
0.29 |
0.13 |
0.40 |
0.58 |
| |
3-ソホロシド-5-グルコシド |
0.23 |
0.10 |
0.60 |
0.68 |
| |
モナルデイン |
0.40 |
0.46 |
0.19 |
0.53 |
| |
サルビアニン |
0.37 |
0.37 |
0.17 |
0.48 |
| |
マッチオラニン |
0.34 |
0.29 |
0.37 |
0.61 |
| シアニジン配糖体 |
|
|
|
|
|
| |
3-グルコシド |
0.38 |
0.25 |
0.17 |
0.26 |
| |
3-ガラクトシド |
0.37 |
0.24 |
0.07 |
0.26 |
| |
3-ルチノシド |
0.37 |
0.25 |
0.19 |
0.43 |
| |
3-ソホロシド |
0.33 |
0.22 |
0.34 |
0.61 |
| |
3,5-ジグルコシド |
0.28 |
0.06 |
0.16 |
0.40 |
| |
3-ルチノシド-5-グルコシド |
0.25 |
0.08 |
0.36 |
0.59 |
| |
3-ソホロシド-5-グルコシド |
0.17 |
0.09 |
0.54 |
0.62 |
| |
ヒヤシンチン |
0.33 |
0.63 |
0.04 |
0.24 |
| |
ペリラニン（シソニン） |
0.35 |
0.34 |
0.11 |
0.43 |
| |
ルブロブラニンC |
0.21 |
0.13 |
0.39 |
- |
| ペオニジン配糖体 |
|
|
|
|
|
| |
3-グルコシド |
0.41 |
0.30 |
0.09 |
0.33 |
| |
3-ガラクトシド |
0.39 |
0.28 |
0.10 |
0.32 |
| |
3-ルチノシド |
0.34 |
0.14 |
0.16 |
0.41 |
| |
3,5-ジグルコシド |
0.31 |
0.10 |
0.17 |
0.44 |
| |
3-ルチノシド-5-グルコシド |
0.29 |
0.12 |
0.37 |
0.60 |
| デルフィニジン配糖体 |
|
|
|
|
|
| |
3-グルコシド |
0.26 |
0.11 |
0.03 |
0.18 |
| |
3-ガラクトシド |
0.23 |
0.11 |
0.03 |
0.18 |
| |
3-ルチノシド |
0.30 |
0.15 |
0.11 |
0.37 |
| |
3-ルチノシド-5-グルコシド |
0.20 |
0.06 |
0.37 |
0.61 |
| |
3,5-ジグルコシド |
0.15 |
0.03 |
0.08 |
0.32 |
| |
アオバニン |
0.30 |
0.22 |
0.05 |
0.32 |
| |
デルファニン（ビオラニン） |
0.31 |
0.24 |
0.31 |
0.59 |
| ペチュニジン配糖体 |
|
|
|
|
|
| |
3-グルコシド |
0.35 |
0.14 |
0.04 |
0.22 |
| |
3-ガラクトシド |
0.33 |
0.13 |
0.04 |
0.20 |
| |
3-ルチノシド |
0.35 |
0.16 |
0.13 |
0.42 |
| |
3-ソホロシド |
- |
0.17 |
0.36 |
0.66 |
| |
3,5-ジグルコシド |
0.24 |
0.04 |
0.08 |
0.32 |
| |
3-ルチノシド-5-グルコシド |
0.23 |
0.06 |
0.38 |
0.61 |
| |
ベタニン |
0.32 |
0.26 |
0.19 |
0.59 |
| マルビジン配糖体 |
|
|
|
|
|
| |
3-グルコシド |
0.38 |
0.15 |
0.06 |
0.29 |
| |
3-ガラクトシド |
0.36 |
0.15 |
0.06 |
0.29 |
| |
3-ルチノシド |
0.35 |
0.16 |
0.15 |
0.45 |
| |
3,5-ジグルコシド |
0.31 |
0.03 |
0.13 |
0.42 |
| |
3-ルチノシド-5-グルコシド |
0.30 |
0.05 |
0.40 |
0.63 |
| |
チボウヒニン |
0.40 |
0.42 |
0.10 |
- |
| |
ネグンテイン |
0.36 |
0.28 |
0.20 |
0.64 |
*濾紙：ワットマンNo.1. 下降法 約20℃
**BAW：n-ブタノール/酢酸/水(4：1：5 上層)； BuHCl：n-ブタノール/2N塩酸(1：1 上層)；
HAｃ-HCl：酢酸/濃塩酸/水(15：3：82)